无微不至 至纯至臻
ÄKTA™ pure micro 现已上市
结构生物学的研究能够对生物分子尤其是蛋白质进行三维结构的测定，共有三大技术：
技术1：X 射线衍射
X 射线晶体学将高纯度，聚合状态均一的蛋白质分子结晶，通过X射线衍射图谱进行结构的解析。
技术2：NMR 核磁共振
NMR 通过获得纯化后的蛋白质在溶液中核磁共振波谱来分析蛋白质的结构和动态变化。
技术3：Cryo-EM 冷冻电镜
Cryo-EM 冷冻电镜技术利用样品在电镜下不同方向的投影图像，重构出分子的三维结构。
不同技术都对样品的纯度和状态都具有很高的要求，但是对于样品量要求不同，其中冷冻电镜技术仅需微量体积的样品就可以实现结构的获得。
结构生物学面临的纯化挑战
挑战1：纯化的高分辨率
样品结晶或冷冻电镜的制样要求样品具有高纯度，聚合状态高度均一，表面电荷高度均一的特点。只有满足这些条件，才能获得衍射质量高的晶体和颗
粒均一的电镜投影图谱。
挑战2：纯化的高回收率
超大蛋白和膜蛋白分子外源表达量极低，原始样品少，要求层析纯化具有很高的回收率，提高纯化的效率。
挑战3：灵敏的紫外监测
微量体积的样品具有较低的紫外吸收值，在纯化过程需要避免稀释，造成紫外信号减弱，无法监测样品。
一切皆为微量纯化设计
微量层析系统具有极小的内部体积（表1和表2）。系统标配微量体积的阀门、微量体积监测器和极细连接管道，它拥有适用于微量样品纯化的硬件参数
和极佳实验表现。
表1. ÄKTA™ pure micro 微量模块内部体积
表2. ÄKTA™ pure micro 与ÄKTA™ pure 25 M 延迟体积对比
显著提高分辨率
与传统的相比，可显著提高实验的分辨率。在使用Superdex™ 200 Increase 3.2/300 微量尺寸排阻预装层析柱进行实验时，样品在ÄKTA™ pure
micro上得到了更好的分离（图1）。
层析柱：Superdex™ 200 Increase 3.2/300
流速：0.075 ml/min
样品 (10 μL)：5 mg/mL thyroglobolin (669 kDa), 0.3 mg/mL ferritin (440 kDa), 4 mg/mL aldolase (158 kDa), 3 mg/mL conalbumin (75 kDa), 4 mg/mL ovalbumin (43
kDa), 3 mg/mL carbonic anhydrase (29 kDa), 3 mg/mL ribonuclease (14 kDa)
图1. ÄKTA™ pure micro 与 ÄKTA™ pure 25 M 实验层析图谱对比表。
F9-T 双板组分收集器
ÄKTA™ pure micro 推荐和组分收集器F9-T搭配使用（图2）。组分收集器 F9-T 能够放置两个多孔收集板，使用微量收集多孔板时，可将收集板放置
于微量收集板架上。微量收集滴头能够产生微小液体，实现微量体积分装收集。滴同步功能（Drop sync）能够在换管收集时防止样品液体溅出。
图2. F9-T 双板组分收集器
高分辨率预装层析柱
Superdex™ Increase 和Superose™ 6 Increase
高分辨率分子筛预装层析柱
颗粒直径为 8.6 μM，10/300 GL 柱型用于25-500 μL 小量样品的精细制备或鉴定；3.2/300 GL 柱型用于 4-50 μL 微量样品的精细制备或鉴定；
5/150GL 柱型用于 4-50 μL 微量样品的快速制备或筛选（图3）。
图3. Superdex™ Increase 与 Superose™ Increase 尺寸排阻预装层析柱
Capto™ HiRes
高分辨率离子交换预装层析柱
颗粒直径为 9 μM，5/50 柱型柱体积为 1mL，载量约 50 mg（图4） 。高分辨率离子交换柱能够有效分离纯化出表面电荷均一的生物样品，保证高质
量的晶体生长和冷冻电镜制样；5/150 GL 柱型用于 4-50 μL 微量样品的快速制备或筛选。
图4. Capto™ HiRes 离子交换预装层析柱
适用于ÄKTA™ pure 25 M 的
微量纯化套件
适用于 ÄKTA™ pure 25 M 的微量纯化套件（图5）专为微量体积生物分子样品的层析纯化而设计。特别适合冷冻电镜结构生物学中微量体积样品的纯
化制备。ÄKTA™ pure 25 M 可通过微量纯化套件对标准的层析设备上的模块和管线进行优化配置，并使用 UNICORN™ 软件进行控制。
图5. 适用于ÄKTA™ pure 25 M的微量纯化套件
文章来源：Cytiva思拓凡公众号